姚小玲
湘雅博爱康复医院，湖南长沙410151
【摘要】目的：测定不同生产厂家生产的抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸的含量，为抗宫炎片质量控制和评价提供依据。方法：采用高效液相色谱法。结果：不同厂家抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸含量存在较小差异。结论：该方法可用于抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸的含量测定。
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关键词 抗宫炎片；齐墩果酸；熊果酸；HPLC
【中图分类号】R284 1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2015)01-0016-02
抗宫炎片由广东紫珠干浸膏、益母草干浸膏和乌药干浸膏等成分组成。具有清湿热、止带下的作用，临床主要用于湿热下注所致的带下病，如宫颈糜烂、白带量增多等。研究发现，紫珠中含有黄酮、酚酸、三萜和苯丙素等类别化合物［1-4］，黄酮是其抗宫颈炎有效成份［5］，三萜主要含齐墩果酸和熊果酸等成分［6-7］，有良好的护肝作用和对肝脏的抗脂质过氧化（LPO）作用［8-9］；益母草主要含有生物碱、黄酮和二萜类等成分，总生物碱具有明显的抗炎镇痛作用和改变血流动力学及血液流变学作用［10-11］；乌药主要含有生物碱和萜类成分，生物碱具有较好的抗菌和抗病毒作用［12-13］。本实验采用高效液相色谱法对抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸的含量进行测定，为抗宫炎片的质量评价提供依据。
1仪器与材料
1 1仪器Agilent1260高效液相色谱仪、G1311B四元泵（带在线脱气机）、G4212B DAD阵列二极管检测器、Agilent汉化版色谱工作站；迪马Diamonil C18( 250mm ×4 6mm，5μm)色谱柱；电子分析天平（岛津AUW120D）；超声波中药处理机（LC-350A）。
1 2试剂齐墩果酸对照品（批号：110709-201206）、熊果酸对照品（批号：110742 -201220）由中国药品生物制品检定研究院提供；甲醇、乙腈为色谱纯（天津赛福瑞科技有限公司）；水为重蒸水；其它试剂均为分析纯。
1 3试药抗宫炎片分析样品购置于湖南怀化龙源药业，分别为2个厂家8个批次的样品，编号见表3。
2方法与结果
2 1色谱条件色谱柱：迪马Diamonil C18（250mm ×4 6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（92∶8）；流速：0 5ml/min；进样量：10μl；检测波长210nm。上述条件下齐墩果酸和熊果酸基线基本能够分离，峰形对称，色谱图见图1。
2 2对照品溶液的制备分别精确称取齐墩果酸4 0mg、熊果酸4 4mg于10ml容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，即得0 40mg/ml齐墩果酸储备液和0 44mg/ml熊果酸储备液。
2 3供试品溶液的制备取抗宫炎片1片，去包衣，干燥碾碎，称取样品粉末（过40目筛）0 2g于10ml容量瓶中，加入甲醇约8ml，放入超声波中药处理机中处理45min，取出，放至室温，用甲醇定容至刻度，进样前用微孔滤膜（0 45μm）过滤，得到供试品溶液。
2 4线性关系考察分别精密量取0 1、0 5、1 0、1 5、2 0、2 5、3 0ml的齐墩果酸和熊果酸于10ml容量瓶，用甲醇定容至刻度，即得4 0、20 0、40 0、60 0、80 0、100 0、120 0μg/ml齐墩果酸系列浓度校正液和4 4、22 0、44 0、66 0、88 0、110 0、132 0μg·ml-1系列浓度校正液，按照2 1色谱条件进样，以浓度为横坐标，面积响应值为纵坐标，分别得齐墩果酸和熊果酸的标准回归方程：Y=5 0672X-1 5431（R=0 9997）；Y=4 1054X+1 0553（R=0 9995），表明齐墩果酸和熊果酸分别在0 0400～1 2000μg、0 0440～1 3200μg范围内线性良好。
2 5精密度试验吸取同一对照品溶液与同一供试品溶液各10μl，分别连续7次进样，测定峰面积，对照品与供试品峰面积的RSD分别为0 69%和0 55%。
2 6稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、16、24h时段进样，其峰面积的RSD为1 38%，结果表明样品溶液24h内稳定性良好。
2 7重复性实验取同一批次的抗宫炎片7份，精密称取0 2g，按照“2 3项”处理，“2 1项”色谱条件进样，测得齐墩果酸和熊果酸含量分别为：0 1116mg/g，0 2209mg/g，RSD（n=7）分别为1 87%和1 35%。
2 8加样回收率试验精密称取同批次已知含量的抗宫炎片6份，分别置于10ml容量瓶中，并加入齐墩果酸和熊果酸，按照“2 3项”处理、“2 1项”色谱条件进样分析，测定齐墩果酸和熊果酸的含量，计算回收率见表1、2。
2 9样品含量测定精确称取两个厂家的抗宫炎片，每个厂家5批，每批取5个平行样，按照“2 3项”进行样品处理、“2 1项”色谱条件进样分析，用外标法分别对齐墩果酸和熊果酸进行含量测定，结果见表3。
3讨论
实验过程中试用了不同的流动相，结果发现，流动相为乙腈-水（92∶8）时峰形对称，出峰时间适宜，杂质峰对被检测峰干扰小。因此，实验采用乙腈-水（92∶8）作为流动相。
实验采用试用无水乙醇和甲醇作为超声提取溶剂，超声提取45min，齐墩果酸和熊果酸基本能提取完全，乙醇作为提取溶剂时有较强的溶剂峰，故本实验采用甲醇作为提取溶剂。
药典规定，抗宫炎片质量标准以广东紫珠中连翘酯苷B和金石蚕苷为标志物来评价其质量，固定相为十八烷基键合硅胶，以乙腈-0 5%磷酸溶液（18∶82）为流动相［14］。此色谱条件极易让弱极性物质在色谱柱上形成强吸附而降低柱效，而采用本实验色谱条件则不会出现以上状况，借此作为抗宫炎片质量评价方法有一定的意义。
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(收稿日期：2014 09 28)
