何玉英 曹梅馨 周宁 陈园园
【摘要】目的探讨过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平与T淋巴细胞亚群之间的关系。方法
选择海珠区妇幼保健院1岁以上的过敏性鼻炎患儿200名（实验组）及正常儿童200名（对照组），应用串联质谱仪检测其血清维生素D水平，采用流式细胞技术检测患儿血中CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD28+T淋巴细胞亚群的表达情况。统计对比维生素D水平与T淋巴细胞亚群、IgE相关性。结果
实验组总维生素D及维生素D3水平低于对照组（p＜0.05），两组维生素D2水平无显著性差异（p＞0.05）。随着维生素D水平的下降，IgE 显著升高，CD8+变化不明显，CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升，CD8+CD28-的百分比则在不断的下降。结论过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平比正常儿童偏低，且以维生素D3水平偏低为主。维生素D缺乏越严重，CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD28+T淋巴细胞亚群失衡越厉害，IgE水平也越高。
【关键词】过敏性鼻炎 儿童 维生素D T淋巴细胞亚群
doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2014.11.012
过敏性鼻炎（Allergic Rhimitis, AR）的定义是人体接触特定致敏源后引发的由IgE 介导的炎症介质的释放，同时有各种炎症细胞及细胞因子参与的鼻黏膜炎症反应性疾病。我国大中城市AR发病率高达8%～24%，对于儿童，发病率也随着年龄增长而逐渐增高，6~7岁发病率为15%，13~14岁接近40%［1-2］，已成为儿科中易发疾病之一。该病的发病机理目前仍未明确，大量的实验均围绕Th1/Th2比例失衡理论展开，认为是Th2细胞过度分化是导致过敏性疾病的重要原因［3-4］。维生素D3是维生素D的活化形式，其对人体骨钙的调节已为大家所知。最近，越来越多的研究表明，维生素D能作用于各种免疫细胞表面的维生素D受体（VDR）调节免疫系统［5］，尤其是T淋巴细胞，维生素D能诱导其增值分化［6］。儿童过敏性鼻炎是一种免疫失衡的疾病，本研究主要探讨过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平与T淋巴细胞亚群之间的关系。
1对象与方法
1.1对象
选择2011年2月~2013年8月在海珠区妇幼保健院就诊的1岁以上过敏性鼻炎患儿200名组成实验组及正常儿童200名组成对照组。两组平均年龄分别为(4.13±1.33)、(4.31±1.25)岁,男/女为0.96、1.04，BMI指数分别为(15.4±2.3)与(15.6±2.1)，均无统计学差异（p>0.05），具有可比性。
1.2方法
1.2.1维生素D检测
实验抽取研究对象5 ml血清，采用国际先进的Applied Biosystems公司高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）仪，进行血清中25OHD2、25OHD3及其总量的检测。与传统免疫发光方法相比具有特异性强、灵敏度高等特点。
1.2.2T淋巴细胞亚群检测及总IgE测定
入选儿童于早晨空腹取血1 ml，EDTA 抗凝并于4 h 内处理标本，应用BD流式细胞分析仪，根据CD8-PC5、CD28－ PE单抗说明书进行操作，应用流式细胞仪检测确定CD8+、CD8 + CD28+、CD8+ CD28 － 和CD28 + T 细胞亚群，同时应用ELITE 4.5软件进行定值分析。总IgE测定运用免疫发光方法进行检测，试剂来自Beckman公司。
1.3统计学方法
应用spss 17.0，进行组间比较，采用t检验，数据分析检验水平为α=0.05。
2结果
2.1两组间血清维生素D水平比较
对照组总维生素D水平为(32.87±4.67)ng/ml，其中维生素D2水平为(3.84±4.21)ng/ml，维生素D3水平为(30.16±5.52)ng/ml；过敏性鼻炎组总维生素D水平(23±2)ng/ml，其中维生素D2水平(3.62±3.04)ng/ml，维生素D3水平(20.38±2.32)ng/ml。两实验组总维生素D及维生素D3水平均存在统计学意义（见图1）。
2.2两组间T淋巴细胞亚群及IgE对比
实验组CD8+CD28+及CD28+分布明显高于与对照组，p<0.01。而实验组CD8+CD28-百分比明显低于对照组,p<0.01。IgE作为反映过敏的敏感指标，实验组明显高于对照组，p<0.01。见表1。
2.3维生素D水平与T淋巴细胞亚群、IgE相关性
将实验组根据维生素D水平不同分为三组，维生素D缺乏组（<15 ng/ml）、维生素D不足组（15 ng/ml≤VitD<25 ng/ml），维生素D充足组（≥25 ng/ml），对比维生素D水平与T淋巴细胞亚群、IgE相关性， 结果显示随着维生素D水平的下降，IgE 显著升高，CD8+变化不明显，CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升，CD8+CD28-的百分比则在不断的下降（见表2）。可见CD8+与维生素D水平无相关性，IgE 、CD8+CD28+，CD28+淋巴细胞亚群百分比与维生素D水平呈负相关，CD8+CD28-则与维生素D水平呈正相关，见表3。
3讨论
变应性鼻炎(Allergic Rhinitis,AR)也称为过敏性鼻炎，为儿科常见疾病，全球平均发病率10%~25%。近几年来AR和哮喘的发病率有明显增加的趋势，尤其是在生活水平较高的工业化发达国家［7］。而我国目前污染日益严重，大气污染合并各种反常气候的刺激大大增加AR的发病率，不均衡饮食也是AR的重要病因［8］。维生素D被证实可以通过调节免疫治疗多种自身免疫病，如可以调节免疫防治哮喘、治疗桥本甲状腺炎、Ⅰ型糖尿病、多发性硬化等［9］，而过敏性鼻炎的发病机理与哮喘类似，本研究通过对比研究发现过敏性鼻炎与血清维生素D水平确实存在相关性，患有常年过敏性鼻炎的儿童血清维生素D水平普遍偏低，且以维生素D3偏低为主，其主要原因可能为食物摄入不足及没有足够的阳光照射［10］。
通过炎症激活T细胞是过敏性鼻炎的关键环节，在各种激活T细胞中激活Th2细胞的因子更占主导作用，CD8 + T细胞根据CD28 是否表达进一步划分，其中CD28-为抑制性T细胞（TS），CD28+为杀伤性T 细胞（TC），TC细胞能识别抗原特异性，直接杀灭病毒和被病毒感染的细胞［11］。TS细胞则通过抑制T细胞及B细胞的起到免疫抑制作用，从而控制抗体的产生及外部抗原引起的各种细胞增殖［12］。本研究过敏性鼻炎患儿与对照组CD8+CD28+及CD28+分布为(21.8±2.8)%、(65.5±7.6)%和(18.3±3.1)%、(43.3±6.4)%，前者明显高于后者，而CD8+CD28-百分比过敏性鼻炎患儿为(6.0±2.1)%，明显低于对照组的(8.2±2.3)%，与曹建伟报道一致［13］。
众多研究发现维生素D明显下调CD4 + 细胞数量同时上调CD8 + 细胞数量，与各种免疫疾病相关。已经被证实能改善如多发性硬化、炎症性肠病、2型糖尿病、湿疹、哮喘等多种自身免疫病及过敏性疾病［14-17］。本研究发现维生素D水平与过敏性鼻炎发生率密切相关，且免疫失衡是重要原因。随着维生素D水平的下降，CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升，CD8+CD28-的百分比则在不断地下降。维生素水平越低，这种免疫失衡就越严重，IgE水平也随之同时上升。
维生素D具有很好的免疫调节作用，可以通过食物及户外晒太阳获得，因此对于儿童，更应增加户外活动的时间，及注意饮食均衡，把维生素D水平检测纳入常规的体检项目，如发现不足即可进行针对性补充，这样就可以有效调节免疫，预防各种过敏性疾病的发生。
［1］ZHANG L, HAN D, HUANG D, et al. Prevalence of self-reported allergic rhinitis in eleven major cities in china ［J］. Int Arch Allergy Immunol, 2009, 149:47-57.
［2］KONG WJ, CHEN JJ, ZHENG ZY, et al. Prevalence of allergic rhinitis in 3-6-year-old children in Wuhan of China ［J］. Clin Exp Allergy, 2009, 39:869-874.
［3］ROBINSON DS. Th -2 cytokines in allergic disease ［J］. Br Med Bull, 2000, 56:956-968.
［4］潘刚强, 袁岳沙, 陈杰, 等. Th1/Th2 细胞因子在过敏性鼻炎患者表达水平研究［J］.检验医学与临床, 2010, 7(22): 2472-2473.
［5］BORGES MD, MARTINI LA, ROGER ROMM, et al. Current perspectives on vitamin D, immune system, and chronic disease［J］. Nutrition, 2011, 27(6): 399-404.
［6］MAALOUF NM. The noncalciotropic actions of vitamin D: recent clinical developments［J］. Curr Opin Nephrol Hypertens, 2008, 17(4): 408-415.
［7］LINNEBERG A, NIELSEN NH, MADSEN F, et al. Increasing prevalence of allergic rhinitis symptoms in an adult Danish population ［J］.Allergy,1999,4:1194-1198.
［8］韩德民.变应性鼻炎临床诊疗手册［M］.北京:人们卫生出版社, 2007: 14- 20.
［9］HERR C, GREULICH T, KOCZULLA RA, et al. The role of vitamin D in pulmonary disease: COPD, asthma, infection, and cancer［J］. Respir Res,2011,12:31.doi:10.1186/1465-9921-12-31.
［10］周宁, 曹梅馨, 黎冬梅,等.过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平的临床研究［J］. 中国医药导报, 2012, 9(17):180-181.
［11］BATLIWALLA FM, RUFER N, LANSDORP PM, et al. Oligoclonal expansions in the CD8 + CD28- T cells largely explain the shorter telomeres detected in this subset: analysis by flow FISH［J］. Hum Immunol, 2000, 61(10): 951-958.
［12］NOCIARI MM, TELFOAD W, RUSSO C. Postthymic development of CD28- CD8 + T cells subset: age associated expansion and shift from memory to native phenotype［J］. J Immunol, 1999, 162(6): 3327-3335.
［13］曹建伟, 丁俊彩. CD8 + CD28 + /CD8 + CD28-T 细胞在过敏性鼻炎患儿外周血中的表达［J］. 广东医学, 2012, 33(24): 3797-3798.
［14］BARONIE, BIFFI M, BENIGNI F, et al. VDR-dependent regulation of mast cell maturation mediated by 1,25- dihydroxyvitamin D3［J］. Leukoc Biol, 2007, 81(1): 250-262.
［15］JEFFERY LE, BURKE F, MURAN, et al. 1,25-Dihydroxyvitamin D3 and IL-2 combine to inhibit T cell production of inflammatory cytokines and promote development of regulatory T cells expressing CTLA-4 and FoxP3［J］. Immunol, 2009, 183(9): 5458-5467.
［16］YAN X, ZHAO Y, PAN J, et al. Vitamin D-binding protein(group-specific component) has decreased expression in rheumatoid arthritis［J］. Clin Exp Rheumatol, 2012, 30(4): 525-533.
［17］CANTORNA MT, ZHAO J, YANG L. Vitamin D, invariant natural killer T-cells and experimental autoimmune disease［J］.Proc Nutr Soc,2012,71(1): 62-66.
